显然，样本前处理是会影响PD-L1的染色结果的，应着重注意以下几点：

1、样本前处理方式方法由于各检测机构的客观情况或者长期形成的习惯经验而很难形成统一，这要求应尽量遵循病理规范化诊断总则要求中对PD-L1检测的前处理原则，包括标本固定方式及时间、存储时间等关键步骤环节。

2、钙化样本即使经过脱钙处理后依然不建议进行PD-L1检测，可能的原因在于钙化会造成细胞表面抗原不能有效裸露，使得能与PD-L1抗体特异性结合的抗原减少或消失，继而造成染色弱或无染色。

3、还有就是样本存储时间，共识建议一般3年内的石蜡样本是可以进行PD-L1检测的，但是也要结合PD-L1不同克隆号的抗体去看待这个问题。如经典的克隆号22C3抗体，由于其靶向蛋白的胞外结构域，细胞外结构域含有的N‑糖基化位点会随时间推移发生降解，因此受聚糖降解影响抗原免疫反应性可能随时间推移而减弱，简单理解为时间越久的样本染色越弱。而靶向蛋白胞内结构域的抗体受存储时间的影响会小很多，这些检测抗体有克隆号E1L3N、SP263、SP142。

图1：8例样本在2018年和2021年两次检测结果的TPS对比，显然E1L3N与三年前的染色结果的一致性要高于22C3 ^[1]

所以良好的开端是成功的一半，开始就做好规范并优先考虑抗风险能力高的检测抗体。

问题五：PD-L1染色可以用标准之外的仪器吗？

1、选择全自动免疫组化仪器进行PD-L1染色是非常有必要的，相较于传统手工染色不仅提高了染色成功率，同时提高了批间染色的稳定性。想来各位医技老师也同样会感同身受。

图2：专家共识中对PD-L1跨平台检测的建议 ^[2]

所以，大可放心去用你想用的平台，前提是经过本地跨平台一致性验证且结果合格。

问题六：如何提高判读结果准确性？

在此声明，小编并非专业的病理医师，不好在各位专家面前班门弄斧，但有几点心得和大家分享：

1、首先应对待检样本进行 H&E 染色评估，用于判断待检样本组织形态和质量，待检样本应不少于 100个活肿瘤细胞才能用来判定 PD-L1 膜染色细胞的百分比。

2、其次要了解PD-L1 膜染色细胞百分比的计算公式，如非小细胞肺癌的判读方式是TPS（和TC等同），只需要识别PD-L1膜染阳性的肿瘤细胞数量，无需识别免疫细胞。计算公式如下图

图3：非小细胞肺癌PD-L1计算公式及判读标准

3、PD-L1在其他癌种的计算公式和判读标准会有所不同，由于篇幅有限不在此展示，有需要的老师可以后台留言获取资料。

4、PD-L1判读很大程度依靠病理医师的经验，结果具有一定主观性在所难免，而且这种重复性工作占用大量时间，对身心都是一种伤害，在此对广大病理老师深表敬意。为了协助病理判读工作，减轻医师工作量并提高判读效率，迈杰医学推出一款专门针对PD-L1（克隆号E1L3N）的可视化数字病理判读软件，目前已经作为II类医疗器械批准上市（注册编号：苏械注准20242211923），欢迎各位病理老师适用。

图4：PD-L1判读软件及特点

所以PD-L1说简单确也不简单。要拿到可信的结果，从样本前处理到仪器染色再到结果判读的每个环节均有很多细节要注意，再次向病理医技老师致敬。

参考文献

[1] Fernandez AI, Gaule P, Rimm DL. Tissue Age Affects Antigenicity and Scoring for the 22C3 Immunohistochemistry Companion Diagnostic Test. Mod Pathol. 2023 Jul;36(7):100159. doi: 10.1016/j.modpat.2023.100159. Epub 2023 Mar 15.

[2] 非小细胞肺癌PD-L1表达临床检测中国专家共识（2023版）